Anti-herpes 53

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Resumen Objetivo El virus del herpes simple (VHS) la reactivación ha sido identificado como un posible factor de riesgo para la enfermedad de Alzheimer (EA) y la beta-amiloide en plasma (A) los niveles pueden ser considerados como posibles biomarcadores de riesgo de AD. El objetivo de nuestro estudio fue investigar la asociación entre los anticuerpos anti-HSV y los niveles de plasma a. Métodos La muestra del estudio consistió en 1222 sujetos (73,9) Y en la media de la cohorte de tres ciudades. anticuerpos IgM e IgG anti-HSV se cuantificaron utilizando un kit de ELISA, y los niveles plasmáticos de A 140 y A 142 se midieron usando una tecnología de ensayo basado en xMAP. análisis de sección transversal de las asociaciones entre los anticuerpos anti-HSV y los niveles de plasma A se realizaron mediante regresión multi-lineal. Resultados Después de ajustar por el centro de estudios, edad, sexo, educación, y el polimorfismo de la apolipoproteína E-e4, plasma A 142 y A 140 niveles fueron específicamente inversamente asociados con los niveles de IgM anti-HSV (20,7, p = 0,001 y 92,4, P 0,007, respectivamente) . En una submuestra con información sobre CLU - CR1 y - vinculada SNP genotipado (n 754), ajuste adicional para los marcadores de CR1 o CLU no modificó estas asociaciones (ajuste para rs6656401 CR1, 25,6, P 0,002 para A 142 y 132.7, P 0,002 para un ajuste de 140 para rs2279590 CLU, 25,6, P 0,002 para a 142 y 134.8, P 0,002 para a 140). No se encontró asociación entre el plasma A A - to-ratio y 142 140 anti-HSV IgM o IgG se pone de manifiesto. Conclusión Los altos niveles de IgM anti-HSV, los marcadores de la reactivación del VHS, se asocian con plasma inferior A 140 y A 142 niveles, lo que sugiere una posible implicación del virus en las alteraciones de la procesamiento de APP y, potencialmente, en la patogénesis de la AD en el ser humano. Cita: Pedo C, Helmer C, H Fleury, Bjot Y, K Ritchie, Amouyel P, et al. (2011) Asociación entre la IgM anti-virus del herpes simple y los niveles plasmáticos de beta-amiloide. PLoS ONE 6 (12): e29480. doi: 10.1371 / journal. pone.0029480 Editor: Kevin K. A. Tetteh, Escuela de Higiene y Medicina Tropical, Reino Unido Recibido: 19 de mayo de 2011 Fecha de aceptación: 29 Noviembre 2011 Publicado: 28 Diciembre, 2011 Copyright: 2011 Pedo et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan. Financiación: El estudio de tres-City se llevó a cabo bajo un acuerdo de colaboración entre el Instituto Nacional de Sant et de la Recherche Mdicale (INSERM), el Instituto de Sant Pública y Dveloppement del Victor Segalen Bordeaux 2 Universidad, y Sanofi-Aventis. La Fundación para la Investigación Mdicale financió la preparación e iniciación del estudio. El estudio 3C también es apoyado por la Caja Nacional Maladie des Travailleurs salaris Dirección Gnrale de la Sant, Mutuelle Gnrale de lEducation Nationale, Institut La Longvit, Gobiernos Regionales de Aquitania y Borgoña, Fundación de Francia, y el Ministerio de Investigación de - Programa INSERM cohortes y colecciones De Donnes biologiques. Este trabajo fue financiado, además, por el programa europeo Communitys cNEUPRO (contrato LSHM-CT-2007 a 037950). Papel de los patrocinadores: patrocinadores del estudio no desempeñó ningún papel en el diseño y la realización de la colección de estudio, gestión, análisis e interpretación de los datos y la preparación, revisión o aprobación del manuscrito. Conflicto de intereses: Sanofi-Aventis tiene un interés en la terapia con anticuerpos anti-beta amiloide para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en concreto, una terapia con anticuerpos anti-beta amiloide se encuentra en desarrollo. Esto no altera la adhesión a los autores todas las PLoS ONE políticas sobre el intercambio de datos y materiales. Introducción investigaciones anteriores han sugerido que el virus del herpes simple (VHS), sobre todo de tipo 1 (HSV-1), puede constituir un factor de riesgo de la enfermedad de Alzheimer (EA) 1. 2. 3. 4. Recientemente se evaluó la asociación entre la seropositividad al HSV y el riesgo de AD en el estudio PAQUID y encontró que los sujetos ancianos que eran IgM-positivas eran más propensos a desarrollar demencia en los próximos 7 años, mientras que no se encontró asociación entre IgG-positivo sujetos 5. Estos resultados sugieren que una reciente reactivación del VHS , que se caracteriza por la asociación específica con anticuerpos IgM anti-HSV, pueden estar involucrados en los procesos neuropatológicos a largo plazo que conducen a la demencia 5. la identificación de biomarcadores intermedios dentro de la cascada amiloide fortalecería considerablemente en el caso de la relación de causalidad sugerida por la evidencia epidemiológica . La relevancia de los biomarcadores plasmáticos de AD, en particular del fragmento de amiloide (A 140 y A 142), recientemente ha sido investigado en los seres humanos, produciendo algunos resultados conflictivos 6. De hecho, en algunos estudios, los sujetos AD exhibió mayor A 140 o A 142 plasma niveles en comparación con los controles, mientras que otros estudios han informado de datos 6. oponerse Hemos informado anteriormente de que un aumento de un 142 - to-una relación de plasma 140 está fuertemente asociada negativamente con el riesgo de demencia 2 años más tarde en la cohorte de base poblacional tres ciudades , lo que sugiere que los cambios en el plasma a 140 y a 142 niveles podrían considerarse un indicador de riesgo a corto plazo de la demencia 7. un meta-análisis de los niveles de plasma de a en el año sugirió que en los estudios longitudinales estos parámetros podrían ser predictores de las tasas más altas de la progresión de la EA, y debe estudiarse más a fondo como biomarcadores potenciales 8. En la relación que une el VHS a AD, nuestra hipótesis es que una asociación específica entre el anti-HSV IgM y no de IgG, anticuerpos y los niveles de plasma de A podría ocurrir en la fase pre-clínica del síndrome de demencia. El presente estudio examinó si los anticuerpos anti-HSV se asociaron con plasma A 140, A 142 y A Un - to-ratio de 142 140 en una muestra de más edad habitantes de la comunidad del estudio de tres ciudades, y si esta asociación puede ser modulada por factores genéticos factores de riesgo de AD apolipoproteínas e-e4 alelo ApoE4 (), CR1 y CLU. que también han estado involucrados en el ciclo de vida del HSV 2. 9. Resultados La muestra principal del estudio consistió en 1222 individuos, edad y 73,9 de media (65.094.1) y la muestra de estudio secundaria, con CLU - y CR1- vinculado determinación genotipado de SNPs, constaba de 754 sujetos, de 74,0 y en promedio (rango 65.092.0). Sus principales características se describen en la Tabla 1. Expandir la Tabla 1. Principales características de la muestra del estudio principal y la muestra de estudio secundario. En la muestra principal estudio, sólo la correlación entre los niveles de crudo IgM anti-HSV y el plasma A 140 y A 142 niveles fueron estadísticamente significativas (r 0,074, 0,009 y P r 0,087, P 0,002, respectivamente). Por otra parte, la media de plasma A 140 y A 142 niveles difieren significativamente de acuerdo con los cuartiles de anti-HSV distribución IgM en los análisis crudo (Tabla 2). La media más baja plasma A 140 y A 142 se observaron niveles en el cuartil más alto de IgM anti-HSV. Como consecuencia, la media A A - to-relación de 142 140 no difirió entre los cuartiles de distribución de anti-HSV IgM. Estos resultados fueron prácticamente sin cambios cuando se llevaron a cabo estos análisis en la muestra de estudio secundario (n 754) (Tabla 3). En contraste, no hubo diferencias significativas en los medios de plasma A 140 y A 142 y de la A - to-relación A 142 140 de acuerdo con los cuartiles de contra HSV-distribución IgG en la muestra principal de estudio (Tabla 2) como en el secundario muestra de estudio (Tabla 3). Expandir la Tabla 2. Media de plasma amiloide niveles por cuartiles de la distribución de IgM o IgG al virus del herpes simple en la muestra de estudio principal (n 1222). Más Expandir Tabla 3. plasmática media amiloide niveles por cuartiles de la distribución de IgM o IgG a virus del herpes simple en la muestra de estudio secundario (n 754). Las asociaciones entre el plasma A 140 y A 142 niveles y de la A-142: para una relación de 140 y los niveles de IgM anti-HSV, considerada como una variable continua o clase, en la muestra principal de estudio se muestran en la Tabla 4. Después del ajuste de centro de estudio, la edad, el sexo y la educación, plasma A 140 y A 142 niveles fueron significativamente inversamente asociados con IgM anti-HSV (Tabla 4, modelo 1). La fuerza de estas asociaciones se mantuvo casi sin cambios después del ajuste adicional para ApoE polimorfismo (Tabla 4, modelo 1ApoE4). Al considerar los niveles de IgM anti-HSV como una variable de clase, el cuartil más alto de IgM se asoció con un nivel de A 142 disminuyó en promedio de 2,9 pg / ml y un nivel de A 140 disminuyó de 11,6 pg / ml en los modelos totalmente ajustados. No se encontró asociación entre el plasma A A - to-142 140 y relación de los niveles de IgM anti-HSV se puso de manifiesto en el análisis de regresión lineal multivariante (tabla 4). Teniendo en cuenta los niveles de IgG anti-HSV ya sea como un continuo o una variable categórica, ninguna asociación con el plasma A 140. A 142 o la A - to-relación A 142 140 se pone de manifiesto (Tabla S1). Por último, no hay interacción estadísticamente significativa con ApoE4 polimorfismo se encuentra en cualquier modelo. Expandir la Tabla 4. Las asociaciones entre los niveles de amiloide en plasma y los anticuerpos IgM contra el virus del herpes simple en la muestra de estudio principal (n 1222). En un análisis de sensibilidad, se obtuvieron resultados similares cuando se excluyeron los sujetos que desarrollaron demencia durante el seguimiento (n 40) (Tabla S2). Teniendo en cuenta la posible participación de la proteína C3b del complemento, y así CR1. y de los CLU en un espacio libre de patógenos y de defensa, las asociaciones entre el plasma A 140. A 142 niveles y A A - to-142 140 y relación de los niveles de IgM anti-HSV o IgG fueron evaluados en la muestra de estudio secundario en el CR1 - estaban disponibles SNP marcadores ligados - y CLU. En esta sub-población (n 754), los resultados de las asociaciones inversas entre el plasma A 140 y A 142 y los niveles de IgM anti-HSV se mantuvieron casi sin cambios (Tabla 5, el modelo 1). Como ya se observó en la muestra principal del estudio, no se encontró asociación entre la A - to-ratio de 140 A 142 y los niveles de anticuerpos IgM. Por otra parte, ninguna asociación entre el plasma A 140. A 142 y se observaron la A - to-ratio de 140 A 142 y los niveles de IgG anti-HSV (Tabla S1). Cuando se controla por rs6656401 (Tabla 5, el modelo 1 CR1) o rs3818361 (Tabla S3. Modelo 1) en el locus CR1, o para rs2279590 (Tabla 5, el modelo 1 CR1) o rs9331888 y rs11136000 (Tabla S3. Modelo 1 CR1 o CLU ) en el locus CLU, los resultados de las asociaciones inversas entre el plasma a 140 y a 142 y IgM anti-HSV eran prácticamente sin cambios. En modelos totalmente ajustados para ApoE4, CR1- y CLU - vinculados SNP, esta asociación inversa se mantuvo significativa (Tabla 5). No hay interacción estadísticamente significativa con cualquier CR1 - o CLU - ligado SNP se encontró en cualquier modelo. Expandir la Tabla 5. Las asociaciones entre los niveles de amiloide en plasma y los anticuerpos IgM contra el virus del herpes simple en la muestra de estudio secundario con CR1 - y CLU = Conectado SNPs datos disponibles (n 754). Discusión Este estudio de cohorte basado en la población es el primero en informar de que los anticuerpos IgM superior a los niveles plasmáticos de HSV se asociaron significativamente con el plasma inferior A 140 y A 142 niveles. Se destacó No se encontró asociación entre los anticuerpos IgG anti-HSV y los niveles de plasma a. Estos resultados fueron independientes de ApoE4 polimorfismo, marcadores CR1 y CLU. Al lado de los conocimientos previos 5, 7. nuestra hipótesis sugiere que existiría una relación entre la IgM anti-HSV y los niveles de plasma de A durante la fase prodrómica largo de la demencia. Aunque el VHS estaba presente en ambos cerebros normales y AD, varias líneas de evidencia han sugerido ya escenarios potenciales por los cuales el VHS puede participar en la patogénesis del complejo de demencia 1. 3. Las áreas del cerebro que son predominantemente dirigidos por agentes infecciosos HSV encefalitis herpética en incluyen corteza frontal, la corteza temporal y el hipocampo, y son también los predominantemente afectados de AD 4. en segundo lugar, HSV-1 es ubicuo y podría residir latente en el sistema nervioso central (SNC) o fácilmente podría entrar en el SNC debido a una disminución en el inmune sistema con el avance de la edad de 10. Una hipótesis ha sugerido que la reactivación periódica leve del virus latente en el cerebro, a causa de la inmunosupresión o estrés relacionado con la edad, en su mayor parte sin síntomas clínicos evidentes, puede conducir a un mayor daño de las células, e indirectamente, a través de procesos inflamatorios, aumento de la susceptibilidad para la EA 11. Esta hipótesis ha sido confirmada en parte en el estudio PAQUID 5 y en conjunto, estos resultados fueron a favor de un efecto a largo plazo de las reactivaciones recurrentes de HSV que conducen a un daño cerebral progresivo, y varios años después, a la demencia. La repetición del estudio PAQUID análisis no era nuestro objetivo principal ya que los participantes de la cohorte de casos y la del presente análisis se realizó un seguimiento durante 4 años solamente. La hipótesis de la cascada amiloide sugiere que el metabolismo aberrante de la proteína precursora amiloide (APP) y la posterior acumulación de oligómeros fragmentos A es un determinante importante de AD 12. Las repercusiones de tales alteraciones cerebrales para periféricos A niveles se entienden sólo en parte 6. Se ha sugerido que los niveles en plasma disminuyeron gradualmente con el tiempo con el aumento del cerebro una deposición en humanos, así 13. los resultados recientes de un incremento de la captación PIB-PET se asocian con niveles más bajos de un plasma en el deterioro cognitivo leve apoyaron la hipótesis de que el aumento del fregadero deposición amiloide en el cerebral se acompaña de niveles más bajos de un periférico en el plasma 14. en ese caso, los bajos niveles de plasma a podrían considerarse posibles marcadores de riesgo a corto plazo de la demencia y podrían reflejar el secuestro previa de una operación en el cerebro 7. 13. 14. 15. la hallazgo por Yaffe y col. equipado cómodamente dentro de esta hipótesis ya que el plasma A 142 niveles y la A - to-relación A 142 140 en correlación con el deterioro cognitivo 16. Debido a la fluctuación de los niveles de plasma de A durante el período presintomático demencia, el proceso dinámico precisa de los niveles plasmáticos de A no es bien conocido hasta ahora. Curiosamente, varios estudios también han relacionado a HSV A 11. De hecho, un segmento de A es altamente homóloga a una glicoproteína codificada por el virus, y una asociación entre HSV-1 y APP durante el transporte axonal del virus puede conducir a alterar la APP procesamiento 11. 17. 18. Por ejemplo, Cheng et al. han ilustrado el posible papel de HSV-1 en el APP dinámica, mostrando que las células infectadas con HSV-1 muestran la distribución APP anormal, y que APP y HSV-1 cápsides co-localizados y viajado juntos dentro de las células 19. En segundo lugar, una huelga localización de HSV-1 ADN dentro de las placas amiloides en los cerebros AD humanos también se ha informado 20. en tercer lugar, la infección con HSV-1 aumenta las enzimas responsables de la formación de a en cerebros de ratones y conduce a una acumulación 21. 22. 23. en una neuronal modelo de cultivo celular, HSV aumenta la formación de oligómeros de a 24, mientras que en las células infectadas con HSV-1, agentes antivirales reducen la acumulación de a y de fosfo-Tau 25. por otro lado, un fibrillas se han demostrado para facilitar la entrada de varios virus, incluyendo HSV-1 26. un mecanismo considerado como una respuesta inicialmente protectora contra la infección viral 4. de todos modos, una actividad anti-infecciosa se ha atribuido a un 27 lo que sugiere que las células del cerebro pueden producir a en un intento de combatir infecciones. En conjunto, estos resultados sugieren que la infección antes en la vida con HSV en el sistema nervioso periférico, con la posterior infección en el SNC, conduce a la activación del sistema inmune, alterar el metabolismo de APP. Recurrente leve reactivación periódica de VHS latente en el sistema nervioso central, como se asocia con los niveles de IgM anti-HSV, puede conducir a un aumento gradual de la producción A. La continua Una acumulación en las células de cerebros puede eventualmente resultar en cambios posteriores en la periferia según la evaluación de la inestabilidad del plasma Una los niveles durante la fase prodrómica largo de la demencia y después por disminución de los niveles plasmáticos de a en el último año antes del diagnóstico 7. 15. relacionadas con la toxicidad un exceso de producción, concomitante con múltiples reactivaciones HSV, por tanto, en efecto, una infección persistente, podría conducente a la lesión cerebral progresiva, con el aumento de la disfunción cognitiva, que conduce a la demencia varios años más tarde 5. Si esta hipótesis es verdadera, la primera infección por el VHS de cerebro puede constituir un factor desencadenante de la cascada amiloide. La reactivación del virus puede exacerbar estas alteraciones cerebrales durante el transcurso de tiempo largo anterior al diagnóstico clínico de la demencia. Esto es confirmado por los resultados obtenidos sin cambios por los análisis de sensibilidad donde los sujetos que desarrollaron demencia en el corto plazo (en los cuatro años posteriores) fueron excluidos en el presente estudio. Por último, la falta de asociación entre los anticuerpos IgG anti-HSV, marcadores de infección pasada, y los niveles de plasma a En el presente estudio también refuerza la hipótesis presente. La respuesta inflamatoria del sistema inmune contra muchas infecciones virales, incluyendo HSV-1, es una posible forma indirecta por la que este virus puede contribuir a AD 5. 11. La exacerbación de la neuroinflamación, debido a HSV-1 infección y / o, en consecuencia, los procesos neuropatológicos , pueden contribuir a aumentar el estrés oxidativo, a la que el CNS es altamente sensible 28. el daño oxidativo se observa comúnmente en la EA, incluso en las primeras etapas de la enfermedad y la infección 29. viral, tal como HSV, también conduce a un exceso de producción de de oxígeno y nitrógeno especies reactivas 11. 30. por último, la eficacia de la autofagia, considerada como de costumbre mecanismo de las defensas celulares implicados en la AD, se reducirían en HSV-1 para su propia supervivencia 23. 31. 32. 33. 34. complejas interacciones entre el ciclo de vida del VHS y los principales productos de los genes de susceptibilidad AD, incluyendo CR1 y CLU 9. también han sido recientemente sugerido 2. 11. Sin embargo, nuestros resultados no están a favor de diferentes asociaciones entre IgM anti-HSV y plasma entre los portadores de una CR1 o CLU factores genéticos predisponentes. Las asociaciones entre anti-HSV IgM y los niveles plasmáticos A también no fueron modulados por ApoE4 polimorfismo en el presente estudio, de acuerdo con al menos una observación anterior de que ApoE4 no modifica la asociación entre HSV seropositividad y el riesgo de AD 5. Aunque han sugerido otros estudios que podría 35. 36. 37. sin embargo, todas las posibles interacciones genes / infección aún no han sido suficientemente estudiados y requieren una mayor investigación 2. Nuestros resultados deben ser interpretados con precaución debido a algunas limitaciones. En primer lugar, dado que nuestro estudio fue transversal, no pudimos determinar si los niveles plasmáticos bajos A observado fueron el resultado de la reactivación del VHS o si los niveles de plasma de los niveles A IgM anti-HSV elevados pre-fecha. De hecho, una explicación alternativa es que la posible acumulación de A en las células del cerebro, con niveles posteriores bajas plasma A, podría ser la primera etapa de los procesos neuropatológicos relacionados con la AD, y además podría ser característica de condiciones favorables para latente reactivación HSV en el SNC . En segundo lugar, el plasma A no sólo reflejan el cerebro consigue el metabolismo, sino también la que se deriva de los tejidos periféricos 6. 38. La relevancia de las mediciones repetidas de plasma de A y los niveles de IgM anti-HSV para evaluar la cronología de los acontecimientos durante el período prodrómico de el proceso de la demencia podría reforzar nuestra hipótesis principal, aunque no se pudo obtener. Por otra parte, la medición de plasma A está sujeto a muchos factores de confusión potenciales que inducen variaciones biológicas y no podemos excluir que estas variaciones podrían, en parte, el aumento de nuestra oportunidad de asociaciones evidencia 39. El líquido cefalorraquídeo (LCR) se cree que reflejan más de cerca lo que está sucediendo en el cerebro. A niveles de CSF 142 se han asociado con EA actual o demostrado ser predictivo de la futura demencia en pacientes con deterioro cognitivo leve 6. Por lo tanto, la replicación del presente análisis de los biomarcadores CSF sería de gran interés. Ninguna de estas muestras estaban disponibles en la cohorte 3C, lo que lleva que seamos incapaces de realizar estos análisis. Sin embargo, entre los grupos con diferentes habilidades cognitivas en ADNI, el plasma A tuvo una correlación mejor con una depósitos cerebrales que CSF A Valores 40. En tercer lugar, el sub-tipo de HSV (HSV-1 o HSV-2) no se determinó en este estudio, aunque lo más probable es que los participantes fueron infectadas por HSV-1. De hecho, la infección por HSV-1 es más frecuente que el VHS-2 y herpes simple encefalopatía causada por HSV-2 es muy rara en adultos 41. Varios puntos fuertes de este estudio deben ser subrayados. Como plasma una concentración varía ampliamente durante la fase prodrómica de demencia 7. nuestra gran tamaño de la muestra aumenta la validez de las observaciones. Por otra parte, este estudio basado en la población se realizó en la cohorte 3C, que es independiente de la muestra de la cohorte anterior (el estudio PAQUID) 5. En conclusión, hemos demostrado que la reactivación del VHS, evaluada por los niveles elevados de IgM anti-HSV, se asocia con plasma de baja A 140 y A 142 niveles, lo que refuerza el apoyo a la hipótesis de que el VHS puede estar implicado en la dinámica del procesamiento de APP y potencialmente en la patogénesis de la AD en el ser humano. Se necesitan más investigaciones para establecer la dirección de la causalidad y explicar los mecanismos subyacentes. Métodos Los participantes Los datos proceden del estudio de tres ciudades (3C), un estudio de cohorte prospectivo de los factores de riesgo vascular de la demencia cuya metodología se describe en detalle en otra parte 42. Se aprobó el protocolo del estudio 3C por el Comité Consultivo para la Protección de las personas que participan en la Investigación Biomédica del hospital Universitario Kremlin-Bictre (París). Una muestra de 9294 habitantes de la comunidad de 65 años y más fue seleccionado en 19.992 millones de las listas electorales de tres ciudades francesas: Burdeos (n 2104), Dijon (n 4931) y Montpellier (n 2259). Todos los participantes firmaron un consentimiento por escrito y todas las investigaciones clínicas se han realizado de acuerdo con los principios expresados ​​en la Declaración de Helsinki. En el examen clínico de referencia, los datos se evaluaron mediante cuestionarios estandarizados y se obtuvo una muestra de sangre. Los participantes fueron reexaminados dos (20.012.003 n 8072) y cuatro (20.032.005 n 7148) años después de la exploración basal. Durante este período de seguimiento, la incidencia de demencia fueron seleccionados de forma activa, mediante un procedimiento de dos etapas después de la administración de la batería de pruebas neuropsicológicas 42. En cada ciclo, los participantes con sospecha de demencia en base a sus actuaciones presentes neuropsicológicos o disminuir en relación con el examen realizado, fueron examinados por un neurólogo. Un comité independiente de neurólogos y luego revisó todos los posibles casos de demencia y analizó en profundidad la historia clínica de cada participante para obtener un consenso sobre el diagnóstico y la etiología de acuerdo con los criterios del Manual Diagnóstico y Estadístico de los Trastornos Mentales. cuarta edición. Un estudio casecohort se llevó a cabo al final de los 4 años de seguimiento para la investigación de los marcadores de riesgo no estándar para la demencia, accidente cerebrovascular y enfermedad cardíaca coronaria (Fig. 1). Entre los 9294 sujetos de la cohorte inicial, 880 fueron excluidos porque no tienen ninguna posibilidad de extracción de sangre o que no participó en ninguno de los exámenes de seguimiento, lo que lleva a una muestra restante de 8414. Para el presente trabajo, el estudio comprendía casecohort un subcohort de 1254 sujetos seleccionados al azar en estratos definidos según el centro, la edad (5 años), y el sexo. Entre ellos, veintinueve sujetos fueron diagnosticados con demencia en el periodo basal y por lo tanto se excluyeron del análisis actual. la incidencia de demencia se diagnosticó en 40 participantes incluidos en el subcohort. Participantes para quienes se fueron excluidos falta al menos una concentración plasmática (n 3) o anticuerpos IgM o IgG contra HSV cuantificación (n 0). Estas etapas de selección nos permitió definir una muestra de estudio principal de 1222 participantes (Fig. 1). Expandir la Figura 1. Diseño del estudio de casos y controles, la definición de la muestra principal del estudio y de la muestra de estudio secundario. Abreviaturas: HSV, virus del herpes simple A, 3C beta-amiloide, Estudio Tres-City. Evaluación de las muestras de sangre concentración amiloide plasma se obtuvieron todos temprano en la mañana, al mismo tiempo para la recogida de datos de línea de base. La sangre se recogió en vacutainers anticoagulantes (EDTA) y se centrifugó a 1.000 g durante 10 minutos. Las muestras de plasma se tomaron alícuotas y se congelaron inmediatamente a 80ºC. El plasma A cuantificación se describe en detalle en otra parte 7. En resumen, el plasma de línea de base un ensayo de péptido se realizó utilizando un kit INNO-BIA (Innogenetics, Ghent, Bélgica), basado en una técnica multiplex xMAP (Luminex, Austin, TX). El conocimiento de la dinámica de los niveles de amiloide de plasma según el tipo de matriz y procesamiento técnico, se utilizó el kit INNO-BIA como uno de los amiloides comercial ELISA kits más fiables 39. La cuantificación de A 140 y A 142 (pg / ml) se determinaron y la A - to-relación A 142 140 se calculó. anticuerpos IgM e IgG contra Herpes Simplex Virus cuantificación Un kit de alta sensibilidad y especificidad ELISA de diagnóstico (Enzygnost anti HSV / IgM e IgG, Dade Behring, Marburg, Alemania) se utilizó para cuantificar los anticuerpos anti-HSV IgM (anti-HSV IgM) y anti anticuerpos - HSV IgG (anti-HSV IgG) 5. 43. títulos de IgM e IgG se expresan en unidades internacionales por mililitro (UI / ml). posibles factores de confusión información sociodemográfica incluyeron la edad, el sexo y la educación. La apolipoproteína E (ApoE) genotipado se realizó en el Lille Genopole (Francia) y el genotipo ApoE4 se consideró dicotómica: presencia de al menos un alelo e4 vs. no e4 alelo 44. ADN de una submuestra de los participantes del estudio 3C, se transfirió a la Centro Nacional francés de Genotypage para la evaluación amplia del genoma, nos da información sobre CLU - CR1 y - vinculada SNP genotipado 9. Entre ellos, 754 sujetos del estudio de casos y controles, para quien los marcadores de CR1- vinculados SNPs (rs6656401 y rs3818361) y CLU - vinculada SNPs (rs9331888, rs2279590 y rs11136000) se han determinado, constituyen la muestra secundaria para el presente análisis (Fig. 1) 9. Once datos para rs11136000 CLU faltaban. Los análisis estadísticos Todos los análisis estadísticos se realizaron con el paquete estadístico SAS (SAS Institute Versión 9.1). Las características demográficas, biológicos y genéticos se describen en la muestra del estudio principal (n 1222) y en la muestra de estudio secundario (n 754). En la muestra principal del estudio, el crudo asociación entre el plasma A 140. Se llevaron a cabo A y la A - to-relación de 142 A 142 140 y la anti-HSV IgM o los niveles de anti-HSV IgG. Por otra parte, se definieron los cuartiles de la distribución de anti-HSV IgM e IgG anti-HSV y media en el plasma A 140. A 142 y la A Un - to-ratio de 142 140 se compararon mediante análisis de varianza (ANOVA) o la prueba de Kruskal-Wallis ANOVA cuando hipótesis no fueron satisfechas (significado aceptado en P 0,05). análisis transversales de la asociación entre el plasma A 140 y A 142 niveles y la A-142: para una relación de 140 (entró en modelos separados como variables continuas) y anti-HSV IgM o IgG anti-HSV se realizaron por separado por lineal multivariable regresión. los niveles de IgM anti-HSV o IgG se han considerado como variable continua, por un lado (es decir, el análisis de una unidad adicional de IgM o IgG) y variable como dicotómica por otra parte: el cuartil más alto de la distribución de anticuerpos anti-HSV IgM o IgG se comparó con los agrupados tres otros cuartiles, elegido como referencia. Estos análisis se ajustaron por el centro de estudios, edad (continua), sexo y nivel de educación en el modelo 1 y adicionalmente para el genotipo ApoE en el modelo 2. Se probaron las interacciones estadísticas entre los niveles de IgG o IgM y el genotipo ApoE. En un análisis de sensibilidad, se excluyeron los sujetos con demencia (n 40). Todos estos análisis se repitieron en una submuestra de 754 sujetos con datos disponibles sobre los marcadores de genotipo de CR1 y CLU (Fig. 1). modelos multivariados de regresión lineal de la asociación entre el plasma A 140. A 142 niveles y la A - to-relación A 142 140 (entró en modelos separados como variables continuas) y anti-HSV IgM o IgG fueron ajustados por el centro de estudios, edad (continua), sexo, nivel de educación y el genotipo ApoE en el modelo 1 . se realizaron ajustes adicionales para marcadores de CR1 (rs6656401 por un lado y rs3818361 en el otro lado) y para los marcadores CLU (rs9331888, rs2279590 y rs11136000 en modelos separados). Por último, los modelos adicionales que se tienen en cuenta el genotipo ApoE4, marcadores CR1 y CLU como variables de ajuste se han realizado. Se probaron o SNPs enlaces CLU - - interacciones estadísticas entre IgM o los niveles de IgG y CR1. Apoyo a Asociaciones de información entre los niveles de amiloide en plasma y anticuerpos IgG contra el virus del herpes simple en la muestra principal del estudio (n 1222) y en la muestra de estudio secundario con CR1 - CLU y - vinculada SNPs datos disponibles (n 754). Las asociaciones entre los niveles de amiloide en plasma y los anticuerpos IgM e IgG a virus del herpes simple en los sujetos de la muestra de estudio principal que permanecieron libres de demencia en el tiempo (n 1182). Las asociaciones entre los niveles de amiloide en plasma y los anticuerpos IgM contra virus del herpes simple en la muestra de estudio secundaria con CR1 - CLU y - ligada SNPs datos disponibles (n 754). Contribuciones de los autores concebido y diseñado los experimentos: CF CH LL JFD. Realizado los experimentos: CF CH LL JFD. Analizados los datos: CF CH LL JFD JCL KR HF YB PA SSM LB. Contribuido reactivos / materiales / herramientas de análisis: SSM LB JCL PA HF YB. Escribió el documento: CF CH LL JFD. consejos significativa concedida: HF YB KR PA SSM LB JCL. Referencias 1. Honjo K, van Reekum R, Verhoeff NP (2009) y la infección por la enfermedad de Alzheimer: qué agentes infecciosos contribuyen a la progresión de la enfermedad de Alzheimer Alzheimer Dement 5: 348360. 2. Carter CJ (2010) APP, APOE, receptor del complemento 1, clusterina y PICALM y su participación en el ciclo de vida del herpes simplex. Neurosci Lett 483: 96100. 3. CJ Carter (2011) placas y ovillos la enfermedad de Alzheimer: Cementerios de una victoria pírrica de la red de defensa inmune contra infección del herpes simple a expensas del complemento y la destrucción neuronal mediada por inflamación. Neurochem Int 58: 301320. 4. Wozniak MA, Itzhaki RF (2010) Los agentes antivirales en la enfermedad de Alzheimer: la esperanza para el futuro Ther Adv Neurol Disorders, 3: 141152. 5. 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